-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adresse
Rom 309, Meihua Building, Taiwan Industrial Park, No.2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Kina
-
E-post
FAQ
Hvilke syntesemetoder bruker Biorunstar for peptidsyntese?
RE: Biorunstar har utviklet forskjellige løsningsfasesyntesemetoder for å møte kundenes krav. Vanligvis brukes fastfase Fmoc-kjemi.
Hvordan sender du peptider? Hvilke QC-data vil bli gitt?
RE: Alle peptider vil bli sendt av DHL eller FedEx Express som i lyofilisert pulver i individuelle godt merket hetteglass, ved romtemperatur. Med unntak av råpeptider, som kun vil bli kontrollert med MALDI-MASS-spektrometri, kommer alle syntetiske rensede peptider med prosjektrapport (CoA), MS-data og HPLC-data. Det vil bli gitt datablad som inneholder nøkkelegenskapene, som peptidsekvens, renhet, mengde, modifikasjon, massespektrumdata og HPLC-data.
Hva er den typiske omløpstiden for peptidsyntese? Hvor lang tid tar det å sende til meg?
RE: Vår typiske behandlingstid er 2-3 uker for et standard peptid under 30 aminosyrer. Omløpstiden varierer avhengig av peptidlengde, mengde, løselighet og vanskelighetsgrad. Vanligvis 3-5 dager for å nå forskere i andre land.
Hvor lenge kan du syntetisere?
RE: Biorunstar har lang erfaring med å syntetisere lange peptider, opptil 130aa. I motsetning til mange peptidleverandører som bare er komfortable med å lage peptider under 30 eller 40aa, har Biorunstar god erfaring med å lage peptider fra 40aa til 90aa. Det er vanskelig å syntetisere lange peptider, spesielt 100aa eller lengre. Hvis du planlegger å syntetisere en sekvens på 130aa eller lenger, vennligst kontakt oss for tilpasset proteinekspresjon og rensingstjeneste.
Hva om noen problemer dukker opp under syntese- eller renseprosessen?
RE: Hvert peptid har sine spesifikke egenskaper. Hvis noen problemer oppstår under syntesen utover vår forventning, og vi ikke kan levere peptidet ditt i tide, vil vi informere deg så snart som mulig. Ved en tilfeldighet at vi ikke er i stand til å lage peptidet, vil du ikke bli belastet for eventuelle kostnader.
TFA-saltform, Acetat- eller HCl-saltform: Hvilken form bør jeg velge?
Som standard syntetiseres peptider i TFA-salt. For celle- eller vevskulturrelaterte eksperimenter bør du vurdere å ha peptider produsert i acetat- eller HCl-saltform på 98 % eller høyere for å unngå unormale responser. Acetat- eller HCl-saltform kan bestilles mot ekstra kostnad.
Hva er holdbarheten til et peptid?
RE: Peptider er stabile i minimum ett år hvis de oppbevares lyofilisert i fryseren. Hvis peptider løses opp, kan holdbarheten reduseres. Hvis peptider inneholder flere reaktive aminosyrer som kan oksideres som Trp, Met men spesielt Cys, kan holdbarheten også reduseres.
Peptidet inneholder flere cysteiner og kan derfor lett danne disulfidbindinger. Hvordan unngår jeg dette?
RE: Dersom peptidsekvensen inneholder flere cysteiner, eller andre reaktive aminosyrer, som lett oksideres, tilbyr Biorunstar å levere peptidet med spor av den sterke reduktanten DTT. Peptidet leveres kun med DTT dersom dette er spesifikt tillatt av kunden.
Hvordan lagrer jeg de syntetiske peptidene mine?
RE: De fleste frysetørrede peptidene vil være stabile ved romtemperatur i 2-3 uker. For langtidslagring bør du lagre frysetørkede peptider ved -20 grad . Gjentatte fryse-tine-sykluser bør unngås. La den få romtemperatur før åpning. Holdbarheten til peptidløsninger er begrenset; en peptidløsning når den er klargjort, bør brukes så snart som mulig.
Hva er renheten for det rå peptidet og det avsaltede peptidet? Hvordan renser du peptidet? Hva er urenhetene?
RE: For korte peptider med normale sekvenser under 15aa er den vanligvis 40-60 % ved HPLC for råkvalitet; 50-70% ved HPLC for avsaltet kvalitet. Jo lengre peptidet er, desto lavere er renheten for råolje eller avsaltet. Peptider blir generelt renset ved HPLC ved bruk av vann og acetonitrilgradient. De fleste urenheter er fragmenter eller delesjonspeptider, ufullstendig avbeskyttede peptider og rester av salt og vann.
Forklaring av peptidrenhet ved HPLC, totalt peptidinnhold og målpeptidinnhold.
RE: Biorunstar sender peptider i henhold til bruttovekten til det frysetørkede pulveret. Det lyofiliserte pulveret inkluderer urenheter som fragmenter eller delesjonspeptider, ufullstendig avbeskyttede peptider, TFA og gjenværende vann. Peptidrenhet måles ved HPLC. Det er mengden korrekt peptid i forhold til alle analytter som absorberer ved ~214 nm (peptidbindingen absorberer), mest sannsynlig sletting, trunkering eller ufullstendig avbeskyttede sekvenser osv. Peptidrenhet ved HPLC tar ikke hensyn til vann og salter som vanligvis finnes i prøven. Totalt peptidinnhold er prosentandelen av totalt peptider som er tilstede i forhold til alt som finnes i det frysetørkede peptidpulveret. Totalt peptidinnhold bestemmes ved analyse av nitrogeninnhold. Målpeptidinnhold i det lyofiliserte peptidpulveret kan derfor konkluderes med formelen: Totalt peptidinnhold X Peptidrenhet ved HPLC.
Hva er metoden for merking av fluorescein?
RE: FITC (Fluorescein isothiocyanat) er den aktiverte forløperen som brukes for Fluorescein-merkingen. For effektiv Nterminal merking, en syv-atom aminoheksanoyl
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) settes inn mellom fluoroforen (fluoroscein) og N-terminalen til peptidet. Denne spaceren hjelper til med å skille fluoroforen fra festepunktet, og reduserer potensielt interaksjonen mellom fluoroforen og biomolekylet den er konjugert til og gjør den mer tilgjengelig for sekundære deteksjonsreagenser.
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) settes inn mellom fluoroforen (fluoroscein) og N-terminalen til peptidet. Denne spaceren hjelper til med å skille fluoroforen fra festepunktet, og reduserer potensielt interaksjonen mellom fluoroforen og biomolekylet den er konjugert til og gjør den mer tilgjengelig for sekundære deteksjonsreagenser.
Er C-terminal merking av Biotin (eller FITC) mulig?
RE: Ja. C-terminal merking av biotin (eller FITC) gjøres ved tilsetning av en lysinrest ved C-terminalen av et peptid, og biotin (eller FITC) festes til lysinsidekjeden via en amidbinding. Lysins positive ladning fjernes.
Hva er passende peptidlengde for antistoffproduksjon?
RE: Generelt anbefales et 10-25-restpeptid. Et lengre peptid kan ha flere epitoper, men kan også ha større sjanse for å danne stabile sekundære strukturer som ikke er native former. Et kortere peptid (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Hva er et MAP?
RE: MAPS eller Multi-Antigenic Peptide er et forgrenet peptid der lineære peptidkjeder er koblet til C-terminalen via polylysinkjernen, og øker dermed størrelsen på hele molekylet. Dette gjøres for å eliminere koblingen av peptider til KLH. Det ser imidlertid ut til at konformasjonen av peptider på MAP er mindre fleksibel, og antistoffer oppnådd av MAP gjenkjenner typisk målprotein sjeldnere enn ved konvensjonell KLH-konjugering. I tillegg produseres det ikke noe fritt peptid når man lager MAPS, noe som gjør det vanskelig å fjerne polylysinkjernestyrte antistoffer. Rensing av MAPS ved HPLC er vanskelig, og MAPS leveres uten masseverifisering på grunn av dets heterogenitet og store molekylstørrelse.
Hvorfor virker min KLH-konjugerte peptidløsning uklar?
RE: KLH eller Keyhole Limpet Hemocyanin er et stort aggregerende protein (MW=4x105 – 1x107). På grunn av størrelsen og strukturen er dens løselighet i vann begrenset, noe som forårsaker et uklart utseende. Dette skal ikke påvirke immunogenisiteten og den uklare løsningen kan brukes til immuniseringer.
Kan du forklare M+Na- og M+K-massetoppene i MALDI-spektra?
RE: Det er veldig vanlig å se Na (natrium) og K (kalium) addukter i MALDI-spekteret. Natrium og kalium kommer fra vannet som brukes i peptidløsningsmidlene. Selv destillert og avionisert vann har spormengder av natrium- og kaliumioner, som aldri kan fjernes helt. Disse blir ionisert under MALDI-massespesifikasjonsprosessen og binder seg til de frie karboksylgruppene i peptidet. Fordi det ikke er noe vannrensesystem som fjerner hvert eneste natrium- eller kaliumion fra vann, er det til tider veldig vanlig og uunngåelig å se natrium- og kaliumaddukter i MALDI-massespesifikasjoner. Dette er ikke en indikasjon på at peptidet ikke er rent, og det skal heller ikke forveksles med feil molekylvekt.